在核酸检测中灭活型病毒保存液具有什么优势?

在核酸检测中灭活型病毒保存液具有什么优势?

在核酸检测中灭活型病毒保存液具有什么优势?

年前,国家卫健委疾控局在国务院联防联控机制新闻发布会上表示,春节返乡人员要拿着7日以内的核酸阴性检测证明才能够返乡。同时返乡人员返回工作地上班时也要做核酸检测。

检测机构要在收到样本后的12小时内反馈检测结果;如果说一定要返乡,返乡人员需持有7日以内的核酸检测阴性证明才能够返乡,这势必会增加医护人员的检测压力,在核酸检测过程中安全性也会变得极为重要,我们通常选用灭活型的病毒保存液来保存核酸。不只是因为它不需要保留病毒活性,更在于它杀灭病毒的同时不会对后续的病毒核酸检测造成影响。

灭活病毒还有以下这些优势:

①、容易保存病毒,而且不容易被降解

灭活型病毒保存液可在常温保存病毒而且运输过程中病毒不容易被降解,按大多数商业化试剂盒进行提取后,获得DNA/RNA质量好,得率高,可完成各种基因检测及分析实验,如PCR、qPCR等。

②、可降低RNA被降解从而造成假阴性的概率

核酸样本保存条件苛刻,RNA极易裂解,4℃仅可存放24h,运输过程过长RNA就会出现提前被降解的现象,从而导致检测假阴性增多。灭活型病毒保存液是采样管内的一种病毒样本保护性运输介质,防止病毒采样后不能及时检测在送检过程中病毒降解,避免因病毒在检测途中提前降解造成假阴性。

③、可以减少核酸提取过程中的感染

灭活型病毒保存液是高效灭活病毒的,在采样与检测环节都比非灭活保存液安全性高,不会造成二次感染,所以操作要求和实验环境要求都稍微低一些。对于快速核酸检测的效率和核酸检测覆盖率来说更有优势。

④、适用于多种病毒检测

灭活型病毒保存液适用于新冠病毒、流感病毒、手足口病毒等常见的病毒样本采集保存运输工作,可采集咽拭子鼻拭子或特定部位组织样本,储存的样本可用于后续的核酸提取或纯化等临床试验。

 

病毒保存液是如何禁锢病毒的?

病毒保存液是如何禁锢病毒的?

新冠病毒等病毒感染的排除和确诊需要进行核酸检测,由于核酸本身存在容易降解的特性,现有常规的病毒保存液无法保证样本中核酸不降解,同时无法及时灭活样本中可能存在的强传染性的病毒,导致样本在保存、运输及开盖检测时造成二次传播,对医护人员造成极高的感染风险。针对这些问题,华晨阳科技迅速应对,适时推出高效、稳定的病毒保存液。

华晨阳科技自主研发的病毒保存液,有非灭活和灭活两种,因为对于不同的检测目的,需要使用不同的病毒保存液,为了满足不同的检测要求,以及不同的病毒检测实验条件,采样不同的保存液是非常有必要的。

非灭活型病毒保存液是不含裂解盐,但是保存的病毒完整性更好,检出率更高,除了核酸检测外还可以用于其他研究。非灭活的病毒保存液,具有抗细菌和抗真菌的作用;牛血清白蛋白(BSA)作为蛋白质稳定剂,可在病毒的蛋白质外壳形成一种保护膜,使其不易分解,保证病毒的完整性;Hank’s缓冲液构建的中性环境,有助于增加病毒的生存时间和感染稳定剂。含有特殊的牛血清白蛋白和Hank’s缓冲液,牛血清白蛋白(BSA)作为蛋白质稳定剂,可在病毒的蛋白质外壳形成一种保护膜,使其不易分解,将病毒灭活,蛋白质外壳形成一种保护膜,使其不易分解,保证病毒的完整性;Hank’s缓冲液构建的中性环境,有助于增加病毒的生存时间和感染稳定性。在病毒核酸的保存效果上明显优于其他厂家的常规裂解液,非常利于当前新冠病毒核酸检测的样本保存。灭活型病毒保存液是可以快速对呼吸道病原体PCR检测试剂盒实现快速检测,特异性灵敏度均不受影响。

你印象中的病毒采样管是什么样的?

你印象中的病毒采样管是什么样的?

病毒是一个由核酸分子和蛋白质构成的非细胞形态,靠寄生宿主身上过活的,是一种介于生命体和非生命体之间的有机物种。它是由一个保护性外壳包裹的一端DNA或者是RNA,借由感染的机制,这些简单的有机体可以利用宿主的细胞系统进行自我复制,但无法独立生长和复制。病毒可以感染几乎所有具有细胞结构的生命体。

病毒保存液是什么呢?病毒保存液是一种病毒采样管内添加的专门用来保护鼻咽拭子采样后样本的保护性液体介质。通常核酸检测时,样品采集处不能直接进行核酸PCR,需要对拭子采集的样品进行转运送检,就需要添加病毒保存液。

病毒的检测不同于常规的生化检测,病毒本身是一种结构简单的微生物,必须寄生在活细胞内。采样后,病毒离开寄主细胞,在采样管内其蛋白质外壳和核酸都会很快降解,这样核酸检测时就无法判断初始采集的样本是否含有病毒,容易造成假阴性。

病毒保存液分为两种:灭活型和非灭活型的

灭活型的病毒保存液:主要是核酸提取裂解液改良的病毒裂解型保存液,里面添加有高浓度的裂解盐,能够迅速高效地使待测样本里的病毒蛋白裂解失活,可以有效防止感染,同时又含有Rnase酶抑制剂,能保护病毒核酸不被降解,后续的NT-PCR实验只要能检测出病毒的核酸即可以做出诊断。而且能在常温下保存相对较长的时间。

非灭活型保存液主要是以运送培养基为基础改良的病毒维持液型保存液。这一种是同时保留了病毒的蛋白质外壳以及病毒核酸DNA或者RNA,这样病毒在体外具有蛋白抗原表位和核酸的完整性,当然操作失误时也有一定的感染性风险。采样后长时间保存需要保持严格低温。

不管是何种病毒保存液,我们在采样过后都要尽快检测或者严格低温保存,保证检测做到准确无误。因病毒的繁殖与变异速度较快,要维持病毒样本的稳定性,病毒保存液起到至关重要的作用

在核酸检测中灭活型病毒保存液具有什么优势?

新冠病毒的检测有必要用病毒保存液吗?

新冠病毒的检测有必要用病毒保存液吗?

近日,我国出现新冠本土病例,除患者伴侣外,其家中门把手、开关、冰箱里的食物,菜板等环境及是食品样本中已完成检测的126份样本有11例呈阳性。这新冠病毒在除了人之外的物品及食物上如此顽强,那病毒样本的体外保存还有必要用病毒保存液吗?

首先,核酸检测中新冠病毒在样本采样后,如果不能及时检测需要运输或短时间内保存,是必须采用病毒保存液的。可能会有人觉得新冠病毒和其他的病毒不一样,在体外要顽强得多,没有必要用病毒保存液来保存病毒样本,但实际上并不是这样的。

的确,自疫情以来,新冠除了在人和少数动物身上检测出阳性外,在食物特别是冷链生鲜类食物上也检测出阳性,甚至在产品外包装、电梯、门把手、开关等频繁接触的物体上也检测出阳性,从这方面来看病毒确实很顽强,这也凸显了疫情防控工作的复杂性、严峻性和防控任务的艰巨性,敲响了疫情防控警钟。

不过需要注意的是,虽然物体上确实检测出了病毒,而且不完全统计的阳性比率还接近十分之一,说明病毒可以在物体表面部分保留一定时间。虽然说保留的病毒可能很少,保留时间可能也不长,但人长期频繁接触的话还是比较有感染风险的。

但是对于核酸检测来说就不一样了,检测需要的是结果完全准确的,如果采样管装的病毒样本没有添加保存液,没有及时检测在运输保存过程中极大概率实会出现病毒核酸降解的,别说十分之一哪怕它在采样管中的存活能达到99%都不行,就算1个也有可能造成降解导致假阴性。

病毒采样管中样本需要运输保存时不仅要添加病毒保存液,还要看不同的检测条件要求而选择灭活型还是非灭活型的保存液,同时也要提醒大家,在人体频繁接触的物体上大家务必也要做好防护措施。

 

病毒保存液在新冠病毒核酸检测流程中的作用

病毒保存液在新冠病毒核酸检测流程中的作用

目前,新型冠状病毒感染的常规检测方法为核酸测定(实时荧光RT-PCR方法),核酸检测是确诊新冠肺炎的金标准。核酸检测的结果是新冠肺炎患者临床确诊和康复出院的重要证据,那么这一结果经过实名流程呢?病毒灭活保存液又在其中发挥着怎样的作用呢?

因为新冠病毒其强大的传染性和特异性,核酸检测过程危险无比。根据国家卫健委发布的《新型冠状病毒感染的肺炎实验室检测技术指南》(第二版),任何新型冠状病毒的检测都必须在具备适当条件的实验室由经过相关技术安全培训的人员进行操作。

新冠病毒核酸检测流程:

第一步:接受样本

核酸检测是样本送检后,从检测人员接收样本开始的。在接受样本前,检测人员需要按照三级防护标准穿戴好,穿着防护衣、护目镜、隔离衣,并戴上N95口罩,双层手套,套上脚套等。

然后用75%的乙醇对实验室内的生物安全柜的空间和台面以及核酸提取仪等进行消毒,还需对标本转运箱进行消毒,并核对被检样本姓名、性别、年龄、编号及检测项目等,待确认转运箱完好后将其放入生物安全柜。

第二步:病毒灭活

病毒灭活是很重要的一步,通常采用56°水浴灭活,时长30分钟左右,这一过程可使病毒性减弱,大大降低了操作人员的感染风险,而且不会影响检测结果。病毒灭活后为避免开盖后气溶胶污染实验室和检测人员,还需要常温静置一段时间。

第三步:核酸提取

核酸提取是所有步骤里面危险系数大的一步,需要在负压实验室的生物安全柜内小心翼翼地打开样本。然后加入核酸提取试剂,把病毒细胞破坏,让核酸释放出来。

第四步:核酸分析,等待结果

在生物安全柜内,将提取的核酸加到PCR扩增反应体系,然后将构建的扩增体系放入扩增仪,进行核酸分析。

第五步:消毒,废物处理

一系列步骤完成后,需要对实验废物进行处理,并对实验仪器、桌面、地面进行消毒。

以上检测步骤危险度大的就是核酸提取,因为新冠病毒感染性强,传播途径多。针对这个问题有什么办法可以解决呢?病毒灭活型保存液很好的解决了这一困难。病毒灭活保存液采用裂解盐可以快速对呼吸道病原体进行灭活,保存,使样品失去感染性。由于是灭活病毒而不用给培养病毒,首先需要的就是对病毒进行裂解失活、破坏其膜蛋白释放核酸,大大降低了核酸提取的危险度。

华晨阳可针对不同需求提供病毒灭活保存液和非灭活病毒保存液,还可以提供采集标本的鼻拭子、咽拭子,有需求的朋友欢迎来电咨询。

病毒保存液怎么是粉红色的?

病毒保存液怎么是粉红色的?

最近收到一些客户或者贸易商的询问,问我们病毒保存液怎么是粉红色的。的确,市场上病毒保存液有无色透明的、粉红色的、红色的、浅橙色的,种类比较多,对于销售来说,产品外观也是比较重要的。

病毒保存液也叫核酸保存液、核酸释放剂或者样本保存液,通常分为灭活型和非灭活型,灭活型保存液由于其中的成分都是无色的,保存液自然也是无色的。像那种粉红色的保存液规则是属于非灭活型病毒保存液,除此之外其他有颜色的均属于非灭活型保存液。

非灭活型病毒保存液中的有效成分其实也是无色的,之所以含有颜色是因为里面添加了pH指示剂酚红。酚红在偏酸性时显黄色,中性时显红色,碱性时显紫红色。其他类型的指示剂也是类似的,通过观察颜色变化我们可以快速判断病毒保存液的pH值是否改变或者出现长菌、变质的情况。

非灭活型保存液与灭活型不同,它不需要对病毒进行灭活而是要延长病毒的体外存活时间,保持病毒的完整性状,从而提高核酸检测的准确性或者作其他不只是保留病毒核酸的研究。而病毒在体外是无法存活的,必须寄生在活细胞内。

非灭活病毒保存液中含有Hank’s液基础,这是一种细胞保存液,可以延长病毒寄生的细胞的存活时间,从而间接提高病毒存活率。此外保存液中还含有多种氨基酸、葡萄糖或蔗糖、蛋白等营养物质。这些因素使非灭活型比灭活型滋生细菌或变质的概率要高,所以调价颜色指示剂可以让我们对保存液是否变质有一个快速判断。

在病毒保存液颜色方面,华晨阳科技根据不同客户的需要做调整,除了灭活型保存液有透明的之外,非灭活保存液既有红色的,也有无色不添加指示剂的,这对于外贸出口或者是国内销售来说都是比较方便的。

 

关于病毒采样管的禁忌

1.使用病毒采样管做的采样,在结束后请尽快送检,采集立即进行2℃~8℃的低温下运输,病毒采样管样品可以在常温下短时间放置。长期保存应该在-20℃以下的低温条件、-70℃可以低温永久冻存。其中H1N1病毒粒子对-20℃敏感,需要保存低于-20℃,采样后不马上在低温下输送,或者不在规定的温度下保存,会影响病毒后期的分离阳性率。

2.病毒采样管只用于病毒类样品的采样,不要用于细菌样品的采样。保存液本身含有的抗生菌对细菌有抑制作用。病毒采样管禁止直接接触被采样者,禁止在病毒保存液里湿浸后对被采样者进行采样。

3.采集病毒样本时,必须严格按照采样程序来进行,确保采样部位正确,采样力均匀。否则会影响病毒分离阳性率。

4.产品过期请不要使用,产品包装破损也不能使用。请及时找厂家或者经销商更换或反映情况

5.检查样品时,请在符合安全水平的实验室里面进行操作

6.采样的病毒采样管请严格按照要求进行存放,不然很容易引起细菌的增殖,前期的保存液中的抗生菌是可以抑制样品中的微生物的,但不要抱着侥幸之心,请按照要求严格存放或运输。

病毒采样管的种类

病毒采样管的种类

普通的病毒采样管采集标本后,病毒本身会迅速在体外溶解,并影响后续测试。而针对于新冠病毒,在运输过程中,必须添加病毒防护解决方案。华晨阳科技将通过两种类型的病毒采样管:灭活型和非灭活型,带您进一步了解病毒采样管。

为了达到不同的检验目的,需要选择不同的病毒采样管。现在广泛使用的这两种类型病毒采样管各有特点。

灭活型病毒采样管:主要是由核酸提取裂解液改造而成的,在采样时,高浓度的胍盐可瞬时有效的灭活病毒,防止工作人员再次感染病毒。新冠标本采样后应送实验室尽快检验,24小时内能检验的可置于2~8℃保存,如未能及时检验的应置于-20℃或以下保存,并保证采样的标本1周内送到对应的实验室,期间应当尽可能避免反复冻融。本产品未采样时,2~35℃、密封、避光保存,有效期为12个月,可有效地节省运输成本。

非灭活型病毒采样管:主要基于维持病毒的活性改进的病毒保存液,加入适宜病毒存活的基础液和营养物质以维持病毒的活性。本产品可以在体外维持病毒的活性以及病毒核酸的完整性,维持病毒的蛋白外壳并且不易被分解,在很大程度上保持病毒样本的完整性。除核酸提取和检验外,该保存液还可用于病毒培养,分离和抗原检验。

客户可以根据不同的实验需求,选择不同规格的病毒采样管。但是应注意,针对于新冠病毒,需根据新规定的新冠检验技术规范,客户应选择正规厂家生产的病毒采样管。

华晨阳科技生产的一次性使用病毒采样管(灭活型)使用方式简便,可有效避免工作人员再次感染,又可常温保存,同时,小体积存储,避免样本被过度稀释,有利于核酸提取,提高检验灵敏度。

 

病毒采样管是商业化的产品吗?

病毒采样管的制作与应用

病毒采样管的制作与应用

自新型冠状病毒爆发以来,R&D及相关诊断试剂生产企业首次推出了逆转录聚合酶链反应核酸检测试剂盒。通过采集口咽拭子或鼻咽拭子样本,提取纯化病毒RNA,即可定性或定量检测“2019-SARS-COV-2”.而该方法使用的样品采集保存容器为“一次性病毒采样管”。

病毒采样管归属几类医疗器械

我们都知道病毒采样管是医疗器械的产品,国内大部分生产企业按一类产品备案,很少有企业按二类产品注册。为了满足各地的迫切需求,不少企业通过“应急通道”申请一类备案许可。病毒采样管由采样拭子、病毒保存液和外包装组成。下面一起来看一下采样拭子、病毒采样管和保存液的生产制作,由于国家没有统一的国家标准或者是行业标准,不同的厂家的产品差别很大。

采样拭子的生产制作要求:

我们都知道采样拭子是直接接触我们的采样部位的,它的采样头部的材质会影响到后续的检测结果。所以一般采样拭子的头部应该采用尼龙纤维(聚酰胺纤维)、涤纶合成纤维(聚酯纤维)或者是人造丝制成,不可以使用含有海藻酸钙海绵或者是木签和竹签。

拭子头的材料不可以是棉制品,因为棉纤维对蛋白质有很强的吸附作用,不易洗脱到后续的保存液中,而含有海藻酸钙和木质成分的碎木棍和竹签也会吸附蛋白质,甚至抑制后续的PCR反应。

拭子头部的制作材料禁止使用海藻酸钙海绵!

采样拭子的手柄目前市场上有两种:折断型和内置型。

折断型的拭子:采样后,将拭子放进病毒采样管里面,然后在折断点处扣在病毒采样管的管壁上折断,弃去尾部,拧紧管盖。

内置型拭子:采样后,直接将采样拭子放入保存管内,拧紧瓶盖即可(一般内置的拭子都会固定在管盖上的一个小孔里面)

相比较这两种拭子,其实后者会相对安全,因为如果使用折断型的拭子采用的是那种比较小的病毒采样管液体比较高一点的话,有可能液体会在折断拭子的瞬间飞溅一点点出来,因此应充分注意产品使用不当造成的污染风险。

采样拭子的手柄材料:

采样拭子手柄的制作材料建议采用ABS材质和PS材质,两者相比较下ABS材质的拭子的柔韧性会比PS材质的柔韧性要更好一些,同时又能够和能轻松的折断且不引发液体溅出。

采样拭子不管是采用什么材料来制作都不可以用海藻酸钙添加剂、木棍和竹签,因为采样拭子的采样量和释放量都要有保证,所以采样拭子的材料不可以含有会影响后续检测的物质。

病毒采样管的制作材料:

制作病毒采样管要注意材料的选择。有关数据表明聚丙烯与核酸的吸附有关,特别是在高张力离子浓度下,聚乙烯比聚丙烯更容易抓住DNA/RNA。

聚乙烯-丙烯聚洛美塑料和一些经过特殊处理的聚丙烯塑料容器更适合储存DNA/RNA。此外,当使用折断型拭子时,应尽可能的选择高度大于8厘米的容器,以防止拭子折断时内容物飞溅和污染。

病毒保存液:

目前市场上广泛使用的病毒保存液有两种,一种是含有营养物质能维持病毒存活的非灭活病毒保存液,另一种是含有核酸提取裂解液的灭活病毒保存液。

非灭活病毒保存液主要是以多种抗生素联合,具有抗细菌和抗真菌的作用;牛血清白蛋白(BSA)作为蛋白质稳定剂,可在病毒的蛋白质外壳形成一种保护膜,使其不易分解,保证病毒的完整性;Hanks缓冲液构建的中性环境,有助于增加病毒的生存时间和感染稳定性。因为病毒保存液的营养丰富,有利于病毒的存活,也有利于细菌的生长。如果保存液被细菌污染后,会大量的繁殖,细菌的代谢产物中含有二氧化碳会使保存液的pH值从粉红色变成黄色,所以大部分厂家都会在配方里加入抑菌成分。推荐的抑菌剂有青霉素、链霉素、庆大霉素、多粘菌素B等。不推荐使用叠氯化钠、2-甲基-4-异噻唑啉-3-酮(CMCI)等抑制剂。

由于非灭活病毒保存液提供的样品基本上都是活病毒,可以保持样品的原创性,不仅可以用于核酸提取和病毒检测,还可以用于病毒培养和分离。但是,需要注意的是,核酸的提取和纯化必须在失活后进行。

灭活病毒保存液:

改良的灭活型病毒保存液主要是核酸提取裂解液改良的病毒裂解型保存液,里面添加有高浓度的裂解盐,能够迅速高效地使待测样本利的病毒蛋白裂解失活,可以有效防止操作员二次感染,同时又含有Rnase酶抑制剂,可以快速灭活包括DNase和RNase在内的各种酶,保护病毒核酸不被降解,杜绝假阴性。含有特殊的核酸保护剂和稳定剂,可以使释放出来的病毒RNA在常温下4天内无明显的降解,为采集和运输争取时间。从而通过后续的实时荧光RT-PCR进行核酸检测,以此判断样本是否含有病毒特征核酸,即是否感染病毒。改良的灭活型病毒保存液能在常温下保存相对较长的时间,节省了病毒样品保存以及运输的成本。这种保存,RNA酶的消除,如果只用于逆转录聚合酶链反应,更合适,但裂解液可以灭活病毒,因此该样品不能用于病毒培养和分离。

制作保存液的水:

制作保存液所用的超纯水要经过分子量为13000的超滤膜过滤,以保证去除生物来源的高分子杂质,如RNase、DNase、内毒素等。不建议使用普通纯净水或蒸馏水。

灭活和非灭活病毒保存液的区别

灭活和非灭活病毒保存液的区别
我们都知道病毒采样管是用来采集、运输和储存流感,禽流感,冠状病毒和其他病毒样本的,以便于后续的提取和扩增。病毒样本采集后,通常无法快速的或者是及时进行PCR检测,而脱离了宿主的病毒则会很快的溶解掉,从而影响后续的检测。因此,在储存病毒和运输病毒时,根据不同的病毒测试室的条件和不同的检测目的使用不同的病毒保存液。

目前,病毒保存液分为灭活型和非灭活型的。那灭活和非灭活他们有什么区别呢?

(1)灭活的病毒保存液在存储病毒的过程中可以裂解样本中的病毒但是保存液中的抑制剂保证了病毒核算不被降解的情况下,使病毒丧失活性和感染性,从而有效防止了实验员的感染率,在后续进行NT-PCR检测也不会受到影响。而且它可以在室温下保存相对较长的时间,从而节省了病毒样本的保存和运输成本。

(2)非灭活的病毒保存液可以维持病毒离开宿主后的活性以及抗原和核酸的完整性,保护病毒蛋白核酸不被溶解,并可以保持病毒样本的原始性。除了核酸提取和检测外,它还可以用于病毒培养和分离。