新冠病毒的核酸检测法

新冠病毒的核酸检测法

新型冠状病毒的检测方法主要包含核酸检测、抗体检测、抗原检测几种方法。由于抗原检测检出率较低,目前新冠检测主要集中在抗体和核酸检测。核酸检测目前是新冠病毒检测的“金标准”,具有早期诊断、灵敏度高和特异性高等特点;但抗体检测操作便捷、检测迅速,可作为核酸诊断的补充手段,但由于抗体检测“假阳性”和“假阴性”的局限性,不适合用于复工复产复学等普通人群筛查,也不适用于在低流地区的流行病学调查。

检测原理:

所有生物除朊病毒外都含有核酸,核酸包括脱氧核糖核酸(DNA)和核糖核酸(RNA)。新型冠状病毒(2019-nCoV)属于Beta冠状病毒属,该病毒是蛋白包裹的单链正链RNA病毒,寄生和感染高等动物(包括人)。病毒中特异性RNA序列是区分该病毒与其他病原体的标志物,新型冠状病毒出现后,我国科学家已经成功发现了新型冠状病毒中的特异性核酸序列。如疑似患者样本中能检测到新型冠状病毒的特异性核酸序列,则认为该患者可能被新型冠状病毒特异性核酸序列的方法是荧光定量PCR(聚合酶链式反应)。由于新型冠状病毒是RNA病毒,试剂盒检测基本都采用反转录加实时聚合酶链式反应法(RT-PCR),扩增病原体的核酸(RNA),同时通过荧光探针实时检测扩增产物。在PCR反应体系中,包含一对特异性引物以及一个Taqman探针,该探针为一段特异性寡核苷酸序列,两端分别标记了报告荧光基团和淬灭荧光基团。探针完整时,报告基团发射的荧光信号被淬灭基团吸收;如反应体系存在靶序列,PCR反应时探针与模板结合,DNA聚合酶沿模板利用酶的外切酶活性将探针酶切降解,报告基团与淬灭基团分离,发出荧光。每扩增一条DNA;链,就有一个荧光分子产生。荧光定量PCR仪能够监测出荧光到达预先设定阈值的循环数(Ct值)与病毒核酸浓度有关,病毒核酸浓度越高,Ct值越小。不同生产企业的产品会依据自身产品的性能确定本产品的阳性判断值。

由于每个RT-PCR反应需要2个小时左右才出结果,因此,试剂盒在开发时一般都针对病毒序列中高度保守的2~3各序列比如编码replicase(复制酶)或者necleocapsid(核蛋白衣,核鞘)的核酸序列设计引物,但是各个方法用的序列都不完全相同。一些方法使用multiplex,也就是把多个目标序列在同一反应管中扩增;另一些采用分步,先用一个目标序列筛查,阳性后再用另一个序列确认,这样可以有效缩短整个流程时间,加快检测速度。另外RNA病毒变异很快,用多个保守目标序列可以防止病毒变异造成的假阴性。

目前批准产品均基于新型冠状病毒基因组中开放读码框1a/b(open reading frame 1ab,ORF1ab)、包膜蛋白(Envelope  protein,E)和核衣壳蛋白(nucleocapsid protein,N)进行选择。不同产品的检测原理基本一致,但是其引物、探针设计存在不同,有单靶区段(ORF1ab)、双靶区段(ORF1ab、N蛋白)、三靶区段(ORF1ab、N蛋白和E蛋白)的检测和判读差别。一般检测位于病毒ORF1ab和N基因上的两个靶标,同一份标本需满足双靶标阳性或重复检测为单靶标阳性或两种标本同时满足单靶标才能确认SARS-CoV-2病毒核酸阳性。

检测流程:

检测程序需要经过五个步骤,取样、留样、保存、核酸提取、上机检测。首先根据试剂盒说明书进行样本采集,样本类型包括咽拭子、鼻拭子、痰液、支气管灌洗液、肺泡灌洗液等。由于RNA易降解,因此,采集样本时使用无RNA酶的拭子和无RNA酶的储存管。获得患者样本后,需尽快进行检测,如无法立即检测需要进行低温封装,并送到专门的检测机构进行检测。检测机构收到样本后,对样本进行核酸提取,核酸提取试剂应使用批准产品说明书中指定的核酸提取试剂盒。最后是荧光PCR核酸检测,也就是上机器检测,将提取物进行荧光PCR扩增反应,需要70—80分钟。

病毒采样管是商业化的产品吗?

病毒采样管的制作与应用

病毒采样管的制作与应用

自新型冠状病毒爆发以来,R&D及相关诊断试剂生产企业首次推出了逆转录聚合酶链反应核酸检测试剂盒。通过采集口咽拭子或鼻咽拭子样本,提取纯化病毒RNA,即可定性或定量检测“2019-SARS-COV-2”.而该方法使用的样品采集保存容器为“一次性病毒采样管”。

病毒采样管归属几类医疗器械

我们都知道病毒采样管是医疗器械的产品,国内大部分生产企业按一类产品备案,很少有企业按二类产品注册。为了满足各地的迫切需求,不少企业通过“应急通道”申请一类备案许可。病毒采样管由采样拭子、病毒保存液和外包装组成。下面一起来看一下采样拭子、病毒采样管和保存液的生产制作,由于国家没有统一的国家标准或者是行业标准,不同的厂家的产品差别很大。

采样拭子的生产制作要求:

我们都知道采样拭子是直接接触我们的采样部位的,它的采样头部的材质会影响到后续的检测结果。所以一般采样拭子的头部应该采用尼龙纤维(聚酰胺纤维)、涤纶合成纤维(聚酯纤维)或者是人造丝制成,不可以使用含有海藻酸钙海绵或者是木签和竹签。

拭子头的材料不可以是棉制品,因为棉纤维对蛋白质有很强的吸附作用,不易洗脱到后续的保存液中,而含有海藻酸钙和木质成分的碎木棍和竹签也会吸附蛋白质,甚至抑制后续的PCR反应。

拭子头部的制作材料禁止使用海藻酸钙海绵!

采样拭子的手柄目前市场上有两种:折断型和内置型。

折断型的拭子:采样后,将拭子放进病毒采样管里面,然后在折断点处扣在病毒采样管的管壁上折断,弃去尾部,拧紧管盖。

内置型拭子:采样后,直接将采样拭子放入保存管内,拧紧瓶盖即可(一般内置的拭子都会固定在管盖上的一个小孔里面)

相比较这两种拭子,其实后者会相对安全,因为如果使用折断型的拭子采用的是那种比较小的病毒采样管液体比较高一点的话,有可能液体会在折断拭子的瞬间飞溅一点点出来,因此应充分注意产品使用不当造成的污染风险。

采样拭子的手柄材料:

采样拭子手柄的制作材料建议采用ABS材质和PS材质,两者相比较下ABS材质的拭子的柔韧性会比PS材质的柔韧性要更好一些,同时又能够和能轻松的折断且不引发液体溅出。

采样拭子不管是采用什么材料来制作都不可以用海藻酸钙添加剂、木棍和竹签,因为采样拭子的采样量和释放量都要有保证,所以采样拭子的材料不可以含有会影响后续检测的物质。

病毒采样管的制作材料:

制作病毒采样管要注意材料的选择。有关数据表明聚丙烯与核酸的吸附有关,特别是在高张力离子浓度下,聚乙烯比聚丙烯更容易抓住DNA/RNA。

聚乙烯-丙烯聚洛美塑料和一些经过特殊处理的聚丙烯塑料容器更适合储存DNA/RNA。此外,当使用折断型拭子时,应尽可能的选择高度大于8厘米的容器,以防止拭子折断时内容物飞溅和污染。

病毒保存液:

目前市场上广泛使用的病毒保存液有两种,一种是含有营养物质能维持病毒存活的非灭活病毒保存液,另一种是含有核酸提取裂解液的灭活病毒保存液。

非灭活病毒保存液主要是以多种抗生素联合,具有抗细菌和抗真菌的作用;牛血清白蛋白(BSA)作为蛋白质稳定剂,可在病毒的蛋白质外壳形成一种保护膜,使其不易分解,保证病毒的完整性;Hanks缓冲液构建的中性环境,有助于增加病毒的生存时间和感染稳定性。因为病毒保存液的营养丰富,有利于病毒的存活,也有利于细菌的生长。如果保存液被细菌污染后,会大量的繁殖,细菌的代谢产物中含有二氧化碳会使保存液的pH值从粉红色变成黄色,所以大部分厂家都会在配方里加入抑菌成分。推荐的抑菌剂有青霉素、链霉素、庆大霉素、多粘菌素B等。不推荐使用叠氯化钠、2-甲基-4-异噻唑啉-3-酮(CMCI)等抑制剂。

由于非灭活病毒保存液提供的样品基本上都是活病毒,可以保持样品的原创性,不仅可以用于核酸提取和病毒检测,还可以用于病毒培养和分离。但是,需要注意的是,核酸的提取和纯化必须在失活后进行。

灭活病毒保存液:

改良的灭活型病毒保存液主要是核酸提取裂解液改良的病毒裂解型保存液,里面添加有高浓度的裂解盐,能够迅速高效地使待测样本利的病毒蛋白裂解失活,可以有效防止操作员二次感染,同时又含有Rnase酶抑制剂,可以快速灭活包括DNase和RNase在内的各种酶,保护病毒核酸不被降解,杜绝假阴性。含有特殊的核酸保护剂和稳定剂,可以使释放出来的病毒RNA在常温下4天内无明显的降解,为采集和运输争取时间。从而通过后续的实时荧光RT-PCR进行核酸检测,以此判断样本是否含有病毒特征核酸,即是否感染病毒。改良的灭活型病毒保存液能在常温下保存相对较长的时间,节省了病毒样品保存以及运输的成本。这种保存,RNA酶的消除,如果只用于逆转录聚合酶链反应,更合适,但裂解液可以灭活病毒,因此该样品不能用于病毒培养和分离。

制作保存液的水:

制作保存液所用的超纯水要经过分子量为13000的超滤膜过滤,以保证去除生物来源的高分子杂质,如RNase、DNase、内毒素等。不建议使用普通纯净水或蒸馏水。

灭活和非灭活病毒保存液的区别

灭活和非灭活病毒保存液的区别
我们都知道病毒采样管是用来采集、运输和储存流感,禽流感,冠状病毒和其他病毒样本的,以便于后续的提取和扩增。病毒样本采集后,通常无法快速的或者是及时进行PCR检测,而脱离了宿主的病毒则会很快的溶解掉,从而影响后续的检测。因此,在储存病毒和运输病毒时,根据不同的病毒测试室的条件和不同的检测目的使用不同的病毒保存液。

目前,病毒保存液分为灭活型和非灭活型的。那灭活和非灭活他们有什么区别呢?

(1)灭活的病毒保存液在存储病毒的过程中可以裂解样本中的病毒但是保存液中的抑制剂保证了病毒核算不被降解的情况下,使病毒丧失活性和感染性,从而有效防止了实验员的感染率,在后续进行NT-PCR检测也不会受到影响。而且它可以在室温下保存相对较长的时间,从而节省了病毒样本的保存和运输成本。

(2)非灭活的病毒保存液可以维持病毒离开宿主后的活性以及抗原和核酸的完整性,保护病毒蛋白核酸不被溶解,并可以保持病毒样本的原始性。除了核酸提取和检测外,它还可以用于病毒培养和分离。

 

 

病毒采样管的使用方法和注意事项

病毒采样管的使用方法和注意事项

一次性病毒采样管通常是由一次性无菌采样拭子和装有保存液的采样管组成。主要用于流感病毒、手足口病毒、麻疹病毒和新冠病毒等病毒样品的采集和运输,也称之为样本运送培养基,现已成为一种商业产品。

病毒采样管的使用方法和注意事项

本一次使用病毒采样管适用于病毒样本的采集、收集、运输和储存样本的。

本产品的优势

1.国际上采用了方便消毒的纸塑包装袋和大独立包装盒

2.伽马射线灭菌,确保无菌

3.我们有灭活的和不灭活的,方便大家选购。

4.采样拭子采用的是聚酯纤维拭子,对微生物无害,可以更大限度地采集和释放标本。可以无标本残留,加快标本处理过程。拭子是独立消毒和包装的。方便使用。

本产品的使用方法:

1.取样前,在标签上注明样品信息。

2.根据不同的实验目的,用取样拭子在相应的部位进行取样。

3.取样后,迅速将拭子放入垂直的放入病毒采样管中,不要碰到管壁避免污染,折断拭子尾部,弃去尾部并拧紧管盖。

4.新采集的标本可以在正常情况下运送到实验室;取样后,如不能及时处理,需要低温储藏。

本产品使用时的注意事项:

1.本产品仅用于体外诊断。禁止内服外用。

2.废物样本收集液应进行消毒。

3.如果发现样品保存液过期或泄漏,应禁止使用

4.如发现取样拭子的包装损坏,应禁止使用,并联系厂家或者是经销商。

 

 

 

病毒采样管是一种通用的采样产品吗?

病毒采样管是一种通用的采样产品吗?

病毒采样管是一种通用的采样产品,可以快速灭活病毒,可以保证检测人员的感染风险还避免了气溶胶感染的风险。还可以用于各种病毒样品、衣原体样品包括最近肆虐全球的新冠病毒原样品的取样,可以进行2~8天的短期储存和运输,在-70℃或液氮环境中长期储存。如果需要长途运输,建议使用冷链运输,避免采样管的样本错过了检测的最佳时期。

病毒采样管是一种通用的采样产品吗?

病毒采样管是一种通用的采样产品吗?

病毒采样管的用途:

病毒采样管用于临床流感、禽流感、手足口病、麻疹、新冠病毒等病毒标本和支原体、解脲支原体、衣原体等标本的采集和运输,可以有效的灭活病毒,避免气溶胶感染的风险

产品特性:

①、该产品具有病毒灭活剂的功效,可以灭活病毒样品,保护核糖核酸不被降解,从而有效的降低气溶胶污染的风险。

②、采样管的加厚和防漏设计确保样本不会泄漏,并符合世卫组织条件和生物安全条例

注意事项:

①、本产品只能且仅可用于体外诊断。

②、取样管中的液体是一种运输保存介质,取样前不能用取样拭子蘸取。

③、废物样本收集液应进行消毒。

④、如果发现病毒采样管的液体变色、浑浊、泄漏和过期等现象,禁止使用

深圳市华晨阳科技有限公司的主要产品有:一次性病毒采样管、病毒采样管套装、一次性采样拭子、鼻拭子、咽拭子等一次性医疗器械耗材,产品畅销国内外,并以上乘的产品质量和优质的服务态度获得众多客户好评。

病毒采样管的种类

病毒采样管的使用方法

病毒采样管的使用方法

使用病毒采样管取样一般分为咽拭子取样和鼻拭子取样

①、鼻拭子取样:采集者左手扶住患者的下颌部,以拭子测量鼻尖到耳垂的距离并用手指做标记,将采样拭子以垂直鼻子(面部)方向插入鼻腔,拭子伸入距离最少应达耳垂部位到鼻尖长度的一半,使拭子在鼻内停留15-30秒,轻轻旋转3-5次,抽出拭子。以另-拭子擦拭另侧异孔。将拭子头浸入采样液中,在采样液中挤压拭子头部数次,用力折断拭子的尾部,将拭子的尾部弃去。

 

②、咽拭子取样,左手用压舌压住患者舌头。右手持拭子擦拭双侧咽扁桃体及咽后壁,将拭子头浸入采样液中在采样液中挤压拭子头部数次,用力折断拭子的尾部,将拭子的尾部弃去。亦可将鼻、咽拭子收集于同-采样管中。

③、根据采样需求,用采样拭子采集样本(未配拭子的保存液,使用人员可自.行提供匹配拭子)。

④、将采集样本之后的采样拭子放置到采样管中。

⑤、在采样拭子杆的易折断截点处折断拭子,弃去尾部,盖好管盖

⑥、在采样管的标签上按需求标注信息。

 

⑦、标本采集后应当在2个工作日内运送至对应的流感监测网络实验室,保存温.度为2-8°C;如未能48H内送至实验室的,应当置70°C或以下保存,并保证采集的标本1周内送到对应的网络实验室。标本应当避免反复冻融。

从使用方法不难看出,不管是口咽拭子还是鼻咽拭子,采样都是一个技术活,难度高、易污染,采集样品的质量直接关系到后续的检测,如果采集的样本病毒载量低,容易造成假阴性,难以确诊。
 
目前市场上销售的试剂盒推荐使用的样本多为口咽拭子或鼻咽拭子。
 

 

病毒采样管(灭活型)说明书

病毒采样管(灭活型)说明书

♣、产品名称

①、通用名称:一次性使用病毒采样管

②、英文名称:Universal Transport Medium

③、规格型号 CY-FOO5-10、 CY-FOO5-20、 CY-FOO5-30

♣、 包装规格:20人份/盒

♣、 预期用途:用于样本的采集、运输和储存等。

♣、 检验原理:

可以对新鲜的临床病毒标本进行蛋白变性而起到病毒灭活作用,杜绝二次传播感染,保证运输及检测人员安全。

♣、 结构组成 :由棉签、 运送培养基(VTM)组合。

♣、 产品要求:

产品应密闭,避免高温,避免强光直射保存.应在清洁卫生、 避免污染、 温度适宜的环境内使用。

♣、 储存条件及有效期:

①、产品应贮存在清洁卫生 、 干燥、 通风的环境内,

②、温度为5℃-35℃;

③、相对湿度<85%RH;

④、产品保质期: 12个月.

♣、 使用方法

①、采样前,在采样管的标签上标注相关信息.

②、 用相 应的采祥棉签进行采样。

③、采祥完毕,迅速将棉签放入采祥管中,将高出采样管的部分折断 ,旋紧管盖.

④、具体采样方法详见如下·

a)、鼻拭子 用采样头轻轻插入鼻腔内部,停留片刻后缓慢转动退出,将采集好的标本浸入冞祥液中,多出部分折断丢弃,旋紧采样管盖.

b)、咽拭子·用采样头擦拭双侧咽扁桃体及咽后壁,将采集好的标本浸入采样液中,多出部分折断丢弃,旋紧采样管盖。

c)、支原体衣原体、脲原体标本采祥

男性:用采样头插入尿道约2cm处旋转,停留片刻后退出,将采集好的标本浸入采样液中。

女性:抹去宫颈口粘液,用采样头插入宫颈管1-2cm取样,将采集好的标本浸入采样液中,多出部分折断丢弃,旋紧采样管盖。

♣、 注意事项

①、病毒采集后,应使—次性采样拭子完全插入保存液中,以使病毒虽大限度保留。

②、采集标本必须及时送检.

③、禁止使用包装破损及过有效期的产品,以防污染。

本一次性使用病毒采样管用于体外诊断,不可用于人体或动物内服外用若吞食可导致严重事件;对眼睛和皮肤有一定的刺激性,若不滇溅入眼睛即用清水冲洗。

 

一次性病毒采样管厂家

一次性病毒采样管厂家

厂家介绍:

深圳市华晨阳科技有限公司注册资金5000万元,是一家致力于核酸检测、分子诊断、医学检验、病毒检测等产品研发、生产、销售于一体的国家高新技术企业。公司拥有二十多项专利,部分专利已经转化应用于市场。产品主要应用于基因检测、医疗机构、生物制药、大型甲等医院、出入境检验检疫、诊断试剂、疾控机构、刑侦法医鉴定等。近年来,公司不断加大自主研发投入,积极引进人才和技术,并与国内外多家科研机构、医学检验所以及三甲医院、基因检测公司、疾病预防控制中心等科研机构有着紧密合作,促进人类健康产业大发展。

公司自主研发的产品有哪些?

公司自主研发产品有:一次性采样拭子、医用棉签、细胞保存液、唾液采集装置、运送培养基、一次性使用病毒采样管、核酸提取或纯化试剂、一次性使用采样器、一次性使用取样器、样本保存液等产品

产品资质:

我们的产品均通过欧盟CE、美国FDA、ISO13485、中国NMPA,SGS,TUV实地认证,拥有多国产品注册商标专用权与销售权,本着“质量至上,求实创新,诚信守法,合作共赢”质量方针产品远销世界各地,并获得广大客户一致认可。

我们的其他头衔:

   深圳市华晨阳科技有限公司是深圳市企业联合会/企业家协会理事单位,

是广东生物产业协会理事单位、深圳市高新技术产业协会理事单位

及深圳市陕西咸阳商会副会长单位和深圳市电子商务促进会副会长单位

我们的位置:

我们不仅位于中国发展最迅速的创新科技城市——深圳市 ,还毗邻机场,出科技园门口直达107高速,所以我们的交通很是便利,

我们具体位于宝安区新桥街道黄埔社区上南东路128号4号厂房八层、十一层。

一次性使用病毒采样管的作用(用途):

一次性使用病毒采样管是我们公司最畅销的明星产品,它适用于各类流感病毒、禽流感病毒、冠状病毒、手足口、风麻疹等病毒样本的核酸提取及后期病毒分离。同时也适用于衣原体、支原体、解脲支原体等标本采集和运输。通常在人体的口腔、咽喉、鼻咽、肛门等部位采集标本。

我们一次性使用病毒采样管套装的组合特征:

一次性病毒采样管包括采样拭子和采样管,我们分开来说一下采样拭子的特点和采样管的特点

①采样拭子:我们公司使用的是尼龙植绒拭子(另有人造丝可选)。因为尼龙植绒对微生物、病毒无毒性作用,且不含RNA酶、DNA酶。它能最大程度的增加病毒样本的采集和释放量,确保PCR检测结果的准确性。

植绒拭子杆为ABS材质,独特的可折断设计,折断过程中无微小碎屑产生。方便放入采样管里而不被污染。

②采样管:管身及管盖为聚丙烯材质,高温高压(121°C,15min) 时不变形,低温(-196°C) 不变脆。耐静态挤压与动态撞击。底部锥形设计耐离心与震荡。内装运送培养基(灭活型、保活型),用于样本的释放保存,杜绝渗漏。

采样管内置磁珠,方便洗脱,利于病毒更多释放入样本保存液中。

一次性使用病毒采样管的分类:

我们的一次性使用病毒采样管的液体我们分为两种,一种是灭活的,一种是不灭活的,其中灭活的病毒采样管他的实操安全性会比较高,它主要是核酸提取裂解液改良的病毒裂解型保存液。采样时内含高浓度的可高效灭活病毒的成分,能有效阻止操作员二次感染,但是又含有能保护病毒核酸不被降解的抑制剂,从而使后续能通过NT-PCR进行检测。而且能在常温下保存相对较长的时间,节省了病毒样品保存以及运输的成本。

而不灭活的可以主要是以运送培养基为基础改良的病毒维持液型保存液。它能够保持病毒在体外的活性以及抗原和核酸的完整性,保护病毒蛋白质外壳不易分解,较大程度地保持了病毒样本的原始性。这种保存液除了用于核酸提取检测外,还能用于病毒的培养、分离以及抗原的检测等,但是采样后长时间保存需要保持严格低温。

对于不同的检测目的,需要选择不同的病毒采样管,目前广泛使用的这两种病毒采样管各有特点。为了满足不同的检测要求,以及不同的病毒检测实验室条件,采样不同的病毒采样管是非常有必要的。但是需要注意的是:不管是灭活型还是非灭活型,在采样之前的病毒采样管都必须严格灭活杀菌,保证管内没有其他微生物,致使采样后病毒分解或其它影响造成错误检测。拭子取样后,如果使用质量欠缺的采集工具或保存液,会影响后续的检测结果甚至造成误诊的假阳性,因此一定要选择具有专业资质厂家生产的病毒采样管。

深圳市华晨阳科技有限公司作为已有10多年经验的医疗耗材以及研发医疗器械生产厂家,具有完善的品质管控体系和万级标准的洁净车间,确保高品质病毒采样管的专业生产,华晨阳致力于打造产品安心,流程放心,客户开心一系列产品服务,华晨阳值得您的信赖。